2019-11-20
环保透明脱蜡液在常规组织染色处理中的效果影响
目的:环保透明脱蜡液对于病理制片中苏木精、伊红染色的效果比较。
方法采用传统的二甲苯试剂作为对照,运用临床上常用的病理组织标本作为实验材料,根据一般的病理切片制作程序制作病理切片,从而比较二甲苯和环保透明脱蜡液在染色上的效果优劣。结果两组切片用苏木精、伊红染色,发现采用环保透明脱蜡液的病理切片细胞结构完好,组织收缩不明显,染色较清晰,透明度高,综合而言比二甲苯制作的病理切片质量上较优,同时具有环保作用。
结论环保透明脱蜡液确实能代替二甲苯用于病理切片的制作,同时也符合其环保的相关要求
在病理切片的临床制作过程中,脱蜡是非常关键性的一步,其脱蜡的好坏直接关系到之后的染色效果。传统的实验步骤中,临床工作者常规采用二甲苯试剂进行病理切片的脱蜡。事实上,二甲苯具有很强的毒性,它可以通过直接接触以及呼吸道消化道的途径进入人体,长时间的淤积会导致慢性中毒。因此使用其替代品势在必行。
我司生产提供的环保透明脱蜡液是目前国际上最新型的透明脱蜡液。脱蜡透明速度快,效果超越二甲苯。
材料与方法:
1.1:2018年1月-8月期间,利来w66旗舰厅在临床上进行大量送检的病理组织标本处理,约1000例,包含胃部标本350例;肝部185例;肺部标本290例;乳腺标本175例。
1.2:试剂:苏木素伊红染色液(上海利来w66旗舰厅生物技术有限公司),环保透明脱蜡液(上海利来w66旗舰厅生物技术有限公司),各种乙醇(国药试剂)。
1.3 组织处理 每个组织标本取材2块 大小1.5cm*1.5cm*0.3cm。分别归入对照组和实验组。将标本分别装入放油二甲苯和环保脱蜡液的组织脱水机中,按照常规脱水程序(固定、脱水、透明、浸蜡)进行处理。透明过程和实验组时间相同,均为1h,然后使用石蜡进行包埋处理。
1.4 组织切片 组织切片厚度为4um,,对照组采用二甲苯脱蜡,实验组采用环保脱蜡液脱蜡,脱蜡时间4min×3,详细步骤参见表1
表1染色机上操作步骤:
编号 |
染色缸 |
染色缸内试剂 |
步骤 |
时间/准确性/活动 |
1 |
1 |
脱蜡液 |
脱蜡 |
0/0/0 |
2 |
2 |
脱蜡液 |
脱蜡 |
4分钟/0/上下4次 |
3 |
3 |
脱蜡液 |
脱蜡 |
4分钟/0/上下4次 |
4 |
4 |
脱蜡液 |
脱蜡 |
4分钟/0/上下4次 |
5 |
5 |
梯度酒精100% |
转换 |
3分钟/0/上下4次 |
6 |
6 |
梯度酒精100% |
转换 |
2分钟/0/上下4次 |
7 |
7 |
梯度酒精95% |
返水 |
1分钟/0/上下4次 |
8 |
8 |
梯度酒精70% |
返水 |
1分钟/0/上下4次 |
9 |
9 |
自来水 |
返水 |
2分钟/0/上下4次 |
10 |
10 |
苏木素染色液 |
细胞核染色 |
3-5分钟/是/上下4次 |
11 |
9 |
自来水 |
冲洗和返蓝 |
5分钟/0/上下4次 |
12 |
12 |
伊红染色液 |
细胞浆对照染色 |
3-4分钟/是/上下4次 |
13 |
11 |
自来水 |
冲洗 |
1分钟/0/上下4次 |
14 |
13 |
梯度酒精70% |
脱水 |
15秒/0/1次 |
15 |
14 |
梯度酒精95% |
脱水 |
15秒/0/1次 |
16 |
15 |
梯度酒精100% |
脱水 |
2分钟/0/上下4次 |
17 |
16 |
梯度酒精100% |
脱水 |
2分钟/0/上下4次 |
18 |
17 |
脱蜡液 |
透明 |
4分钟/0/上下4次 |
19 |
18 |
脱蜡液 |
透明 |
4分钟/0/上下4次 |
20 |
19 |
脱蜡液 |
透明 |
4分钟/0/上下4次 |
21 |
20 |
脱蜡液 |
透明 |
0/0/0 |
1.5用超净封片胶封片。
结果:
两组切片在切片与透明效果,环保脱蜡液要比二甲苯好,而且实验组染色效果较好,色彩较为鲜明,对比度高,有利于观察,同时环保无害。见表2.
表2 二甲苯与环保透明脱蜡液制作病理切片的效果比较
指标 |
实验组(环保透明脱蜡液) |
对照组(二甲苯) |
切片效果 |
组织硬度恰当,容易切出4um薄片,切片上无裂隙皱褶 |
组织较硬、易碎、较易切除4um薄片,部分组织上有少量裂隙皱褶 |
脱蜡效果 |
好 |
好 |
透明效果 |
较好,组织不收缩 |
好,组织有少量收缩 |
染色背景 |
干净 |
干净 |
染色效果 |
着色牢固、鲜艳、色彩丰富、核浆对比清晰、颜色饱和度好 |
色彩较丰富,核浆对比清晰,颜色饱和度较好,相对实验组有所不足 |
环保效果 |
无色无味,对人体无毒无害,较为环保 |
有刺激气味,对人体毒性作用、不环保 |
讨论:
一直以来,在运用石蜡进行病理切片的制作过程中,组织进行固定、脱水、透明、浸蜡、包埋、切片、染色的常规操作处理。因二甲苯是传统的组织脱蜡和透明具有良好的组织脱蜡和透明作用,被长期广泛应用在常规石蜡制片当中,一直被选为首选试剂,然而在制作病理切片的过程中,病理技术人员往往需要加热二甲苯试剂,更增加了二甲苯的挥发量,长期接触可以引起神经衰弱综合症还可以造成免疫功能低下、贫血、血细胞减少、皮炎湿疹等。因此这种操作程序对机体和自然环境都产生了极其不利的影响。国外的相关文献有报道有学者使用松节油作为二甲苯的新试剂,然而虽然松节油的毒性较低,然而在制片中脱蜡和透明的效果远远不如二甲苯,使之无法在临床上大面积推广使用。新型环保透明脱蜡液是脂肪族碳氢化合物,其成分无毒,加热后对人体不会产生不利影响,符合国际环保标准。经过实验表明,我司的环保脱蜡透明液与二甲苯相比,更好的保护组织原有结构和细胞形态,对组织进行彻底的脱蜡和透明,效果超越二甲苯。
参考文献:
1:徐婷.江苏省海门市人民医院病理科 环保透明脱蜡液对病理制片中苏木精、伊红染色的效果影响[J].医学信息,2013.(16)339-340.doi.