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环保透明脱蜡液在常规组织染色处理中的效果影响

2019-11-20

环保透明脱蜡液在常规组织染色处理中的效果影响

目的:环保透明脱蜡液对于病理制片中苏木精、伊红染色的效果比较。

方法采用传统的二甲苯试剂作为对照,运用临床上常用的病理组织标本作为实验材料,根据一般的病理切片制作程序制作病理切片,从而比较二甲苯和环保透明脱蜡液在染色上的效果优劣。结果两组切片用苏木精、伊红染色,发现采用环保透明脱蜡液的病理切片细胞结构完好,组织收缩不明显,染色较清晰,透明度高,综合而言比二甲苯制作的病理切片质量上较优,同时具有环保作用。

结论环保透明脱蜡液确实能代替二甲苯用于病理切片的制作,同时也符合其环保的相关要求

 

在病理切片的临床制作过程中,脱蜡是非常关键性的一步,其脱蜡的好坏直接关系到之后的染色效果。传统的实验步骤中,临床工作者常规采用二甲苯试剂进行病理切片的脱蜡。事实上,二甲苯具有很强的毒性,它可以通过直接接触以及呼吸道消化道的途径进入人体,长时间的淤积会导致慢性中毒。因此使用其替代品势在必行。

我司生产提供的环保透明脱蜡液是目前国际上最新型的透明脱蜡液。脱蜡透明速度快,效果超越二甲苯。

材料与方法:

1.1:2018年1月-8月期间,利来w66旗舰厅在临床上进行大量送检的病理组织标本处理,约1000例,包含胃部标本350例;肝部185例;肺部标本290例;乳腺标本175例。

1.2:试剂:苏木素伊红染色液(上海利来w66旗舰厅生物技术有限公司),环保透明脱蜡液(上海利来w66旗舰厅生物技术有限公司),各种乙醇(国药试剂)。

1.3 组织处理 每个组织标本取材2块 大小1.5cm*1.5cm*0.3cm。分别归入对照组和实验组。将标本分别装入放油二甲苯和环保脱蜡液的组织脱水机中,按照常规脱水程序(固定、脱水、透明、浸蜡)进行处理。透明过程和实验组时间相同,均为1h,然后使用石蜡进行包埋处理。

1.4 组织切片 组织切片厚度为4um,,对照组采用二甲苯脱蜡,实验组采用环保脱蜡液脱蜡,脱蜡时间4min×3,详细步骤参见表1

表1染色机上操作步骤:

编号

染色缸

染色缸内试剂

步骤

时间/准确性/活动

1

1

脱蜡液

脱蜡

0/0/0

2

2

脱蜡液

脱蜡

4分钟/0/上下4次

3

3

脱蜡液

脱蜡

4分钟/0/上下4次

4

4

脱蜡液

脱蜡

4分钟/0/上下4次

5

5

梯度酒精100%

转换

3分钟/0/上下4次

6

6

梯度酒精100%

转换

2分钟/0/上下4次

7

7

梯度酒精95%

返水

1分钟/0/上下4次

8

8

梯度酒精70%

返水

1分钟/0/上下4次

9

9

自来水

返水

2分钟/0/上下4次

10

10

苏木素染色液

细胞核染色

3-5分钟/是/上下4次

11

9

自来水

冲洗和返蓝

5分钟/0/上下4次

12

12

伊红染色液

细胞浆对照染色

3-4分钟/是/上下4次

13

11

自来水

冲洗

1分钟/0/上下4次

14

13

梯度酒精70%

脱水

15秒/0/1次

15

14

梯度酒精95%

脱水

15秒/0/1次

16

15

梯度酒精100%

脱水

2分钟/0/上下4次

17

16

梯度酒精100%

脱水

2分钟/0/上下4次

18

17

脱蜡液

透明

4分钟/0/上下4次

19

18

脱蜡液

透明

4分钟/0/上下4次

20

19

脱蜡液

透明

4分钟/0/上下4次

21

20

脱蜡液

透明

0/0/0

1.5用超净封片胶封片。

 

结果:

两组切片在切片与透明效果,环保脱蜡液要比二甲苯好,而且实验组染色效果较好,色彩较为鲜明,对比度高,有利于观察,同时环保无害。见表2.

表2 二甲苯与环保透明脱蜡液制作病理切片的效果比较

指标

实验组(环保透明脱蜡液)

对照组(二甲苯)

切片效果

组织硬度恰当,容易切出4um薄片,切片上无裂隙皱褶

组织较硬、易碎、较易切除4um薄片,部分组织上有少量裂隙皱褶

脱蜡效果

透明效果

较好,组织不收缩

好,组织有少量收缩

染色背景

干净

干净

染色效果

着色牢固、鲜艳、色彩丰富、核浆对比清晰、颜色饱和度好

色彩较丰富,核浆对比清晰,颜色饱和度较好,相对实验组有所不足

环保效果

无色无味,对人体无毒无害,较为环保

有刺激气味,对人体毒性作用、不环保

 

讨论:

一直以来,在运用石蜡进行病理切片的制作过程中,组织进行固定、脱水、透明、浸蜡、包埋、切片、染色的常规操作处理。因二甲苯是传统的组织脱蜡和透明具有良好的组织脱蜡和透明作用,被长期广泛应用在常规石蜡制片当中,一直被选为首选试剂,然而在制作病理切片的过程中,病理技术人员往往需要加热二甲苯试剂,更增加了二甲苯的挥发量,长期接触可以引起神经衰弱综合症还可以造成免疫功能低下、贫血、血细胞减少、皮炎湿疹等。因此这种操作程序对机体和自然环境都产生了极其不利的影响。国外的相关文献有报道有学者使用松节油作为二甲苯的新试剂,然而虽然松节油的毒性较低,然而在制片中脱蜡和透明的效果远远不如二甲苯,使之无法在临床上大面积推广使用。新型环保透明脱蜡液是脂肪族碳氢化合物,其成分无毒,加热后对人体不会产生不利影响,符合国际环保标准。经过实验表明,我司的环保脱蜡透明液与二甲苯相比,更好的保护组织原有结构和细胞形态,对组织进行彻底的脱蜡和透明,效果超越二甲苯。

 

参考文献:

1:徐婷.江苏省海门市人民医院病理科 环保透明脱蜡液对病理制片中苏木精、伊红染色的效果影响[J].医学信息,2013.(16)339-340.doi.